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第一季結尾吊足觀眾胃口的大車禍後，迪恩（傑森安克斯 飾）陷入昏迷，成為迷走醫院的遊魂，父親約翰為拯救愛子，竟召喚殺妻仇敵黃眼惡魔以自己生命進行交易，並在臨終前告訴迪恩一個關於山姆（傑瑞巴萊德奇 飾）的驚人秘密…第二季就在這個山姆和惡魔的神秘關係中揭開序幕，讓兩兄弟的獵魔之旅除了遭逢吸血鬼、變形者、活死人、地獄之犬等黑暗勢力的挑戰外，還要面對山姆死亡預知能力所引來的賞金獵人追殺、惡魔糾纏等重重危機，而一路上零星線索逐漸拼湊而呼之欲出的山姆身世之謎，也跟著【超自然檔案】的情節發展在本季結尾推往令人屏氣凝神的正邪終極對決！此外，因女友潔西卡死亡而踏上除魔之路的山姆，在本季裡遇上了更多和他一樣具有超異能的人，並意外與女狼人譜出一段淒美戀情；背負著守護弟弟使命的迪恩，竟也步上父親後塵，與惡魔進行交易！毛骨悚然的超自然事件中，編劇們還別出心裁地加入一集逗趣幽默的節目，請出半人半神的搗蛋鬼大鬧校園，外星人綁架男學生跳慢舞等稀奇古怪的事件接連發生，讓迪恩和山姆一個頭兩個大！